shRNA vs siRNA
Durante o processo de RNA de interferência (RNAi), a expressão de um gene alvo é derrubada com alta especificidade e seletividade. O RNAi é um processo natural e envolve pequenos RNAs de interferência (siRNA) e short hairpin RNA (shRNA) e shRNA bi-funcional. Atualmente, o RNAi é amplamente utilizado como uma ferramenta para terapia personalizada do câncer. As aplicações de RNAi são basicamente feitas com o siRNA de dupla fita sintetizado quimicamente e moléculas de shRNA baseadas em vetor. Embora essas duas moléculas tenham resultados funcionais semelhantes, elas diferem em sua estrutura; assim, os mecanismos moleculares de ação, as vias de RNA e os efeitos fora do alvo dessas duas moléculas também diferem.
shRNA
shRNA é uma sequência de pequena molécula de RNA que faz uma curva fechada que pode ser usada para silenciar a expressão de um gene alvo durante o RNAi. A expressão de shRNA é alcançada por um vetor, que pode ser um vírus ou uma bactéria ou pela entrega de plasmídeos. Eles são sintetizados no núcleo das células e transportados ao citoplasma para processos posteriores. Essas moléculas têm vias de maturação semelhantes de miRNA; assim, a síntese de miRNA forneceu a base para a compreensão da síntese de shRNA. Tanto a RNA polimerase II quanto a III podem transcrever shRNA através dos promotores da RNA polimerase II ou III. A vantagem do uso de shRNAs é que eles têm uma taxa de degradação e turnover relativamente baixa. A desvantagem é que ele precisa de um vetor de expressão, o que pode causar alguns problemas de segurança.
siRNA
Os siRNAs são moléculas de RNA de fita dupla compostas por 20-25 pares de bases de comprimento. Estes são usados para supressão de genes silenciando qualquer gene com sequência de nucleotídeos complementar na via de RNAi. O knockdown do gene por transfecção de siRNA é frequentemente malsucedido devido ao efeito transitório; especialmente em células que se dividem rapidamente e a supressão não dura mais. Para superar esse problema, o siRNA é modificado pela introdução de uma estrutura curta em gancho. Esta molécula modificada é então conhecida como shRNA. shRNA deve ser convertido em siRNA por um Dicer, a fim de continuar sua função normal.
Qual é a diferença entre shRNA e siRNA?
• Ao contrário do siRNA, shRNA tem uma estrutura extra em gancho. shRNA é uma versão modificada de siRNA.
• shRNA requer um vetor de expressão, enquanto siRNA não.
• shRNA pode ser usado para knockdown de longo prazo, enquanto siRNA pode ser usado apenas para knockdown de curto prazo de genes.
• Ao contrário da supressão de genes de siRNA, a supressão de shRNA é de longa duração e, se for inserido por meio de um vetor viral apropriado, pode produzir efeitos permanentes de silenciamento do gene.
• Dicer é necessário para converter o shRNA de volta à molécula de siRNA para executar suas funções normais.
