Diferença chave - Phusion vs Taq Polimerase
As DNA polimerases são enzimas amplamente utilizadas em técnicas de biologia molecular e também estão naturalmente presentes em todos os organismos que se submetem à replicação do DNA. Eles são as principais enzimas de polimerização envolvidas durante a replicação. A DNA polimerase é capaz de adicionar nucleotídeos à extremidade 3 'livre da fita de DNA, causando assim a extensão de uma nova fita. Atualmente, devido aos desenvolvimentos da biologia molecular no diagnóstico de doenças e aplicações industriais, é importante fabricar polimerases com várias propriedades benéficas. Isso aumenta a precisão do método e o torna uma técnica mais rápida. Phusion e Taq polimerase são duas enzimas polimerase termoestáveis produzidas comercialmente que são utilizadas em aplicações moleculares especiais. Phusion é uma DNA polimerase isolada de Pyrococcus furiosus e é usada principalmente em experimentos de clonagem para aumentar a fidelidade. A Taq DNA Polimerase é a DNA polimerase padrão usada na Reação em Cadeia da Polimerase (PCR) e é isolada da bactéria termoestável; Thermus aquaticus. A principal diferença entre as duas enzimas é o microrganismo de origem. Phusion é isolado do extremófilo, Pyrococcus furiosus, enquanto a polimerase Taq é isolada do termófilo, Thermus aquaticus. A polimerase Taq é isolada do termófilo Thermus aquaticus. A polimerase Taq é isolada do termófilo Thermus aquaticus.
CONTEÚDO
1. Visão geral e diferença principal
2. O que é Phusion
3. O que é Taq Polimerase
4. Semelhanças entre Phusion e Taq Polimerase
5. Comparação lado a lado - Phusion vs Taq Polimerase em forma tabular
6. Resumo
O que é Phusion?
A Phusion DNA polimerase é uma nova polimerase produzida pelo isolamento da enzima de Pyrococcus furiosus, que é uma arquéia extremofílica. Esses micróbios residem em condições de temperatura extremamente alta, tornando a polimerase uma polimerase altamente estável ao calor. A polimerase Phusion é usada para obter fidelidade extrema sobre a polimerase termoestável convencional; Polimerase Taq. A Phusion polimerase é capaz de amplificar modelos longos de até 7,5 kb de DNA genômico. A capacidade de polimerização óptima de Phusion polimerase é a 72 0 C. Phusion também é usado na clonagem de produtos para sequenciação, análise de expressão e análise de mutações.
A polimerase de DNA de fusão tem a atividade de exonuclease 3 '- 5'. Isso permite a revisão da fita recém-sintetizada após a síntese. Conseqüentemente, as incompatibilidades de nucleotídeos são facilmente reparadas. Assim, possui menor taxa de erro. As vantagens gerais da polimerase Phusion são;
- Extreme Fidelity
- Alta velocidade e tempo de extensão reduzido
- Reações robustas e requer otimização mínima
- Alto rendimento
Figura 01: Phusion
A principal desvantagem da polimerase Phusion é que ela é inibida na presença de trifosfato de desoxiuridina (dUTP). Quando dUTPs são acumulados na mistura de reação, pode inibir as ações da polimerase Phusion. Isso é evitado tratando a mistura de reação com dUTPase antes de adicionar a enzima. Atualmente, uma variante resistente ao dUTP da polimerase Phusion conhecida como Pfu Turbo é usada em vez da polimerase Phusion como um remédio para este problema.
O que é Taq Polymerase?
A invenção da Taq DNA polimerase revolucionou o campo da biologia molecular. Resolveu um grande problema na amplificação do DNA. A Taq DNA polimerase é uma enzima polimerase estável ao calor extraída e isolada da bactéria termofílica Thermus aquaticus. A descoberta dessas enzimas leva ao desenvolvimento da PCR. Essa enzima permitiu o uso da reação em cadeia da polimerase na amplificação do DNA, em vez das laboriosas técnicas convencionais de clonagem. O PCR agora é usado em diagnósticos moleculares, campos agrícolas e industriais, com muitas novas variações adicionadas à técnica.
Figura 02: Taq Polimerase
A Taq DNA polimerase funciona na faixa de temperatura ideal entre 72 0 C - 80 0 C. A Taq DNA polimerase requer um cofator; magnésio por sua função. A Taq polimerase não tem a capacidade de revisão 3 '- 5', portanto, a taxa de erro da Taq DNA polimerase é alta em comparação com os tipos mais novos de DNA polimerase, como Phusion polimerase etc. Mas, a popularidade da Taq DNA polimerase continua a ser o mesmo em todo o mundo da ciência devido à conveniência e flexibilidade da enzima.
Quais são as semelhanças entre Phusion e Taq polimerase?
- As enzimas da polimerase Phusion e Taq são enzimas polimerizantes que são capazes de adicionar nucleotídeos à extremidade livre 3 'da fita de DNA.
- As polimerases Phusion e Taq requerem uma sequência de primer para iniciar a polimerização.
- As polimerases Phusion e Taq são estáveis ao calor.
- As polimerases Phusion e Taq são usadas em mecanismos de PCR para amplificar DNA.
- Ao adicionar a polimerase à mistura de reação, as polimerases Phusion e Taq são adicionadas por último para garantir a eficiência da enzima.
- As polimerases Phusion e Taq são sintetizadas comercialmente para fins experimentais de biologia molecular.
- As polimerases Phusion e Taq requerem um cofator para completar sua função.
Qual é a diferença entre Phusion e Taq Polymerase?
Artigo Diff meio antes da tabela
Phusion vs Taq Polimerase |
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| Phusion é uma DNA polimerase isolada de Pyrococcus furiosus e é usada principalmente em experimentos de clonagem para aumentar a fidelidade. | A Taq DNA Polymerase é a DNA polimerase padrão usada na Reação em Cadeia da Polimerase (PCR), e é isolada da bactéria termoestável Thermus aquaticus. |
| Organismo Fonte | |
| Fusão é extraída de archaea extremofílica - Pyrococcus furiosus. | Essas obras literárias abrangem desde o período da colonização até o período da descolonização. |
| Capacidade de leitura de prova | |
| A capacidade de leitura de prova de 3 '- 5' está presente no Phusion. | A capacidade de leitura de prova 3 '- 5' está ausente na polimerase Taq. |
| Fidelidade | |
| Alta fidelidade existe com Phusion. | A polimerase Taq mostra baixa fidelidade. |
| Amplificação | |
| Phusion é capaz de amplificar longos fragmentos de DNA. | A polimerase Taq é capaz de amplificar fragmentos de DNA muito mais curtos. |
| Intoxicação dUTP | |
| A ação de fusão é inibida pelo acúmulo ímpar. | A polimerase Taq não é inibida por dUPT. |
Resumo - Phusion vs Taq polimerase
Phusion e Taq DNA polimerase são duas polimerases estáveis ao calor usadas em técnicas de PCR. Phusion é uma polimerase isolada do extremófilo, Pyrococcus furiosus, enquanto a Taq é isolada da bactéria termoestável Thermus aquaticus. A descoberta da Taq DNA polimerase leva à invenção de PCR. O Phusion tem muitas vantagens sobre o Taq, o que fez do Phusion a melhor opção na produção de DNA de alta fidelidade. No entanto, a Taq polimerase ainda é usada como a enzima polimerase padrão em PCR. Esta é a diferença entre Phusion e Taq polimerase.