Diferença Chave - Imunofluorescência vs Imuno-histoquímica
O diagnóstico de doenças, que utiliza métodos biológicos moleculares, tornou-se uma área emergente da tecnologia de laboratórios clínicos. Inclui todos os testes e métodos para identificar uma doença e compreender a causa de uma doença por meio da análise de DNA, RNA ou proteínas expressas em um organismo. Os rápidos avanços no diagnóstico molecular permitiram a pesquisa básica sobre doenças transmissíveis e não transmissíveis. Eles são usados para determinar mudanças na sequência ou níveis de expressão em genes ou proteínas cruciais envolvidos na doença. Imunofluorescência (IF) e Imuno-histoquímica (IHC) são duas dessas técnicas amplamente utilizadas na biologia do câncer. IF é um tipo de IHC onde um método de detecção de fluorescência é usado para analisar anticorpos monoclonais e policlonais, enquanto IHC usa métodos baseados em produtos químicos para detectar os anticorpos monoclonais e policlonais. Esta é a principal diferença entre IF e IHC.
CONTEÚDO
1. Visão geral e diferença principal
2. O que é imunofluorescência
3. O que é imunohistoquímica
4. Semelhanças entre imunofluorescência e imunohistoquímica
5. Comparação lado a lado - Imunofluorescência vs imunohistoquímica na forma tabular
6. Resumo
O que é imunofluorescência (IF)?
A imunofluorescência é uma técnica de detecção em que os anticorpos usados no ensaio são marcados com corantes fluorescentes ou proteínas fluorescentes para o propósito de detecção. Os anticorpos secundários marcados podem resultar em sinais de fundo indesejados; portanto, a técnica de IF é baseada na marcação do próprio anticorpo primário no momento, a fim de evitar sinais indesejados durante a detecção. Por meio dessa técnica, a ligação não específica entre o anticorpo primário e o secundário é evitada e é mais rápida, pois não há etapa de incubação secundária envolvida. A qualidade dos dados também é melhorada.
Figura 01: Coloração de imunofluorescência dupla para BrdU, NeuN e GFAP
Fluorocromos ou corantes fluorescentes são compostos que podem absorver radiação, de preferência radiação ultravioleta que é excitada. Quando as partículas atingem o estado fundamental a partir do estado excitado, elas emitem radiação que é capturada e detectada por um detector para formar um espectro. É de grande importância que o marcador fluorescente seja compatível e estável para a reação específica e deve ser conjugado adequadamente ao anticorpo para obter resultados precisos. Um dos fluorocromos mais utilizados é o isotiocianato de fluoresceína (FITC), de cor verde, com pico de absorção e emissão de onda de 490 nm e 520 nm, respectivamente. A rodamina, outro agente usado em IF, é de cor vermelha e tem comprimentos de onda de pico de absorção e emissão distintos de 553 nm e 627 nm.
O que é imunohistoquímica (IHC)?
IHC é um método de teste molecular praticado para identificar e confirmar a presença do antígeno na célula-alvo. A célula alvo pode ser uma partícula infecciosa, um patógeno microbiano ou uma célula tumoral maligna. IHC utiliza anticorpos monoclonais e policlonais para determinar a presença de antígenos presentes na superfície celular das células alvo. A técnica é baseada na ligação antígeno-anticorpo. Um marcador de detecção é conjugado a estes anticorpos para detectar a presença ou ausência do antígeno particular. Esses marcadores podem ser marcadores químicos, como enzimas, anticorpos marcados com fluorescência ou anticorpos marcados com rádio.
Figura 02: Corte do cérebro de camundongo corado por imunohistoquímica
A aplicação mais popular do IHC é na biologia de células cancerígenas para identificar a presença de tumores malignos, mas também é usado para a detecção de doenças infecciosas.
Quais são as semelhanças entre imunofluorescência e imuno-histoquímica?
- A imunofluorescência e a imuno-histoquímica ocorrem em condições in vitro.
- Ambas as técnicas são baseadas no antígeno-anticorpo
- Ambas são técnicas muito rápidas.
- Os resultados das técnicas são reproduzíveis.
- Ambos melhoraram a qualidade dos dados.
- Essas técnicas são utilizadas no diagnóstico de câncer e doenças infecciosas.
Qual é a diferença entre imunofluorescência e imunohistoquímica?
Artigo Diff meio antes da tabela
Imunofluorescência vs Imunohistoquímica |
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| IF é uma técnica de detecção em que os anticorpos usados no ensaio são marcados com corantes fluorescentes ou proteínas fluorescentes para detecção. | IHC é uma técnica de detecção em que os anticorpos usados no ensaio são marcados com produtos químicos ou elementos radioativos para detecção. |
| Precisão | |
| A precisão é maior na técnica IF em comparação com IHC. | A precisão é menor em IHC. |
| Especificidade | |
| IF é mais específico. | IHC é menos específico. |
Resumo - Imunofluorescência vs Imunohistoquímica
Os mecanismos moleculares trouxeram muitas mudanças no campo da medicina, dando origem a métodos de testes moleculares avançados que trouxeram revoluções no campo do diagnóstico. Essas invenções levaram a uma identificação e confirmação rápida e precisa da doença, permitindo assim a administração e a produção de medicamentos com sucesso. Essas técnicas também são usadas em farmacologia para encontrar os alvos dos medicamentos e para confirmar as propriedades farmacocinéticas do medicamento durante o metabolismo do medicamento. IF e IHC são dois métodos de diagnóstico baseados no conceito de ligação de antígeno e anticorpo, embora o modo de detecção em ambas as técnicas seja diferente. O IF usa o princípio da fluorescência para detectar o antígeno e o IHC usa o conceito de conjugação química para detectar o antígeno. Esta é a diferença entre IF e IHC.
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