Diferença principal - Página SDS vs. Página nativa
SDS e página nativa são dois tipos de técnicas de eletroforese em gel de poliacrilamida usadas em Biologia Molecular. A principal diferença entre SDS Page e Native Page é o tipo de gel de poliacrilamida usado. Na página SDS, um gel desnaturante é usado, portanto, as moléculas são separadas com base em seu peso molecular. Em contraste, em Native Page, géis não desnaturantes são usados. Portanto, as moléculas são separadas com base em seu tamanho, carga e forma.
Eletroforese em gel de poliacrilamida (Página) usa um gel feito pela polimerização de monômeros de acrilamida com bisacrilamida de metileno. A poliacrilamida é mais resistente e mais estável ao calor do que a agarose. Os géis de poliacrilamida possuem um tamanho de poro menor que permite a separação eficiente de proteínas. Existem dois tipos principais de configurações de Página, a saber, Página SDS e Página Nativa. A eletroforese em gel de SDS Page ou Dodecil Sulfato de Sódio Poliacrilamida separa as proteínas com base em seus pesos moleculares. Géis desnaturantes são usados na página SDS. Native Page usa géis não desnaturantes e separa proteínas com base em seu tamanho, carga e forma (conformação 3D).
CONTEÚDO
1. Visão geral e diferença principal
2. O que é página SDS
3. O que é página nativa
4. Semelhanças entre a página SDS e a página nativa
5. Comparação lado a lado - Página SDS x Página nativa em formato tabular
6. Resumo
O que é a página SDS?
A página SDS é a técnica eletroforética mais comum usada para separar proteínas com base em seu peso molecular. O gel é feito pela adição de SDS (dodecilsulfato de sódio), que é um detergente. SDS dentura proteínas em monômeros. SDS é um detergente aniônico. Portanto, ele adiciona uma carga líquida negativa às proteínas dentro de uma ampla faixa de pH. Quando a carga negativa líquida é transmitida às moléculas de proteína, devido à variação de carga, as estruturas complexas são quebradas. Devido à carga negativa, as proteínas se atraem para a extremidade positiva. Assim, as moléculas com menor peso molecular viajam mais rápido na matriz do gel e podem ser observadas próximo ao ânodo, enquanto as proteínas de maior peso molecular são observadas mais próximas dos poços.
Figura 01: Página SDS
A ligação do SDS à cadeia polipeptídica é proporcional à sua massa molecular relativa. Portanto, a massa molecular também pode ser determinada através da página SDS. A coloração dos géis SDS Page é feita por coloração com azul de bromofenol. As aplicações da página SDS variam em maior extensão, onde podem ser usadas para estimar a massa molecular relativa e para determinar a abundância relativa de proteínas em uma mistura de proteínas. A página SDS também pode ser usada para determinar a distribuição de proteínas em uma mistura de proteínas. A página SDS também é aplicada para purificar e avaliar proteínas. É usado como um procedimento preliminar para western blotting e hibridização, que por sua vez é usado para mapeamento e identificação de proteínas.
O que é página nativa?
A eletroforese em gel de poliacrilamida nativa (Native Page) usa um gel não desnaturante. Portanto, SDS ou qualquer outro agente desnaturante não é adicionado à matriz de gel. Em Native Page, a separação de proteínas é baseada na carga e no tamanho da proteína. Portanto, a mobilidade da proteína depende da carga e do tamanho da proteína.
A carga da proteína depende das cadeias laterais dos aminoácidos. Se as cadeias laterais estiverem carregadas negativamente, a proteína receberá uma carga negativa geral e vice-versa. As proteínas retêm uma conformação 3D devido ao dobramento que ocorre. O dobramento resulta de vários tipos de ligações em proteínas, como ligações dissulfeto, interações hidrofóbicas e ligações de hidrogênio. Portanto, se a página nativa for carregada em um pH neutro, as proteínas serão separadas de acordo com a forma molecular da proteína. Portanto, Native Page pode ser usado como uma técnica sensível para detectar a mudança na carga ou conformação da proteína.
A principal vantagem da página nativa é que a proteína usada para a análise da página pode ser recuperada em seu estado original após a análise da página, pois a proteína não é perturbada durante o processo. Native Page é uma técnica de rendimento relativamente alto e a estabilidade da proteína é aumentada.
Figura 02: página nativa
Após a conclusão da execução do gel, o gel Native Page pode ser visualizado pela coloração com azul de bromofenol ou qualquer outro reagente de coloração adequado. As aplicações do Native Page incluem a separação de proteínas ácidas, incluindo glicoproteínas, como a eritropoietina recombinante humana ou a identificação de proteínas presentes na albumina de soro bovino (BSA).
Quais são as semelhanças entre a página SDS e a página nativa?
- Os sistemas SDS Page e Native Page usam gel de poliacrilamida como matriz do gel.
- Ambos são usados para separação e identificação de proteínas.
- Ambos usam mobilidade eletroforética para separar os compostos.
- Ambos podem ser feitos de maneira vertical ou horizontal (geralmente feitos como configurações de Página verticais porque o comprimento de execução é maior).
- O aparelho de eletroforese, incluindo o tanque de gel, pentes e fonte de alimentação, é necessário para a operação de ambas as técnicas.
- A visualização do gel pode ser feita por métodos de coloração em ambas as técnicas.
Qual é a diferença entre a página SDS e a página nativa?
Artigo Diff meio antes da tabela
Página SDS x Página nativa |
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| SDS Page ou Sodium-dodecyl sulfate Page separa as proteínas com base em seu peso molecular e usa um gel desnaturante. | Native Page usa géis não desnaturantes e separa proteínas com base em seu tamanho, carga e forma (conformação 3D). |
| Tipo de Gel | |
| Um gel desnaturante é usado na página SDS. | Um gel não desnaturante é usado na página nativa. |
| Presença de SDS | |
| O SDS está presente como um detergente para transmitir uma carga negativa na amostra na página do SDS. | SDS não está presente na página nativa. |
| Base de Separação | |
| A separação das proteínas depende do peso molecular da proteína na página SDS. | A separação depende do tamanho e da forma da molécula de proteína na página nativa. |
| Estabilidade da proteína | |
| A estabilidade da proteína é baixa na página SDS. | A estabilidade da proteína é alta na página nativa. |
| Recuperação da proteína original | |
| Não é possível porque está desnaturado na página SDS. | Possível na página nativa. |
Resumo - Página SDS vs Página nativa
SDS Page e Native Page são dois tipos de técnicas de eletroforese em gel de poliacrilamida usadas para separar proteínas. A página SDS é tratada com um detergente chamado SDS. O SDS transmite uma carga negativa geral para a proteína, que então resulta na desnaturação da proteína. Portanto, as proteínas são separadas com base em seu peso molecular. Em contraste, a técnica Native Page não usa nenhum agente desnaturante. Assim, as proteínas são separadas com base em seu tamanho ou forma. Esta é a diferença entre a página SDS e a página nativa.
