Diferença Entre Tripsinização Quente E Fria

2024 Autor: Mildred Bawerman | [email protected]. Última modificação: 2023-12-16 08:41

Diferença chave - tripsinização quente vs fria

A tripsinização a quente e a frio são dois métodos usados na desagregação enzimática de células em cultura de células animais. A principal diferença entre a tripsinização quente e fria, como os nomes sugerem, depende da temperatura na qual a tripsina é adicionada para a desagregação celular. A tripsinização a quente ocorre em condições de temperatura mais alta (36,5 - 37 ⁰ C), enquanto a tripsinização a frio ocorre em condições de baixa temperatura.

Durante o processo de cultivo celular primário de células animais, três métodos principais são utilizados e têm se mostrado bem sucedidos. Os três métodos incluem a desagregação mecânica das células, a desagregação enzimática das células e a técnica de explante primário. A desagregação enzimática das células leva ao isolamento das células e é feita pela enzima de degradação da proteína tripsina. Portanto, esse processo é conhecido como Tripsinização. A tripsinização pode ser feita em duas condições diferentes, ou seja, tripsinização a quente e tripsinização a frio. A tripsinização a quente é o método de tratamento das células com tripsina em condições quentes a uma temperatura de 36,5 - 37 ⁰C. A tripsinização a frio é o processo de tratamento com tripsina que ocorre em condições mais frias, de preferência em gelo mantendo temperaturas muito baixas.

CONTEÚDO

1. Visão geral e diferença principal

2. O que é tripsinização quente

3. O que é tripsinização fria

4. Semelhanças entre tripsinização quente e fria

5. Comparação lado a lado - tripsinização quente vs fria em forma tabular

6. Resumo

O que é tripsinização a quente?

A tripsinização pode ser feita para desagregar os componentes celulares a fim de isolar as células para produzir uma cultura de células primária. A tripsina é uma enzima de degradação de proteínas, e a mistura de enzimas usada na tripsinização pode ser um extrato bruto ou um produto purificado. O extrato bruto é considerado mais eficiente na lise de proteínas e na desintegração celular, pois contém outras enzimas degradativas.

A tripsinização a quente é o método enzimático mais comumente usado para a desagregação celular que ocorre em condições de temperatura mais alta. Antes do tratamento por tripsinização, o tecido desejado é picado em pedaços menores. Facilita o processo de desagregação fácil. O tecido picado é então lavado em um meio especial conhecido como meio de dissecção de sal basal.

Após a conclusão da etapa de lavagem, as células são transformadas em um frasco contendo a enzima ativa, que é a tripsina. Como esta técnica implica um protocolo de tripsinização quente, a tripsina é colocado a uma temperatura de cerca de 37 ⁰ C, durante cerca de quatro horas.

Diferença entre tripsinização quente e fria

Figura 01: Tripsina

Os conteúdos são misturados e agitados usando métodos de centrifugação para facilitar o protocolo e para acelerar o processo de desagregação. Uma vez atingido o tempo recomendado, as células podem ser derivadas do sobrenadante. As células derivadas do sobrenadante são então incubadas a uma determinada temperatura e tempo.

O que é tripsinização a frio?

A tripsinização a frio é o outro tipo de tripsinização que ocorre em condições de frio. Nessa técnica, as células que são picadas e lavadas são colocadas em frascos no gelo e depois embebidas em tripsina. O período de imersão é muito mais longo - cerca de 6 a 24 horas.

Após conclusão do procedimento de imersão, a tripsina é removido a partir do ligado de células, e as peças de tecido são incubadas a 37 ⁰ C durante cerca de 20 - 30 minutos. A desagregação das células é realizada por pipetagem repetida da mistura de tecidos. Isso permitirá que as células se dissociem da membrana e cheguem ao sobrenadante. Uma vez que as células estão no sobrenadante, elas são incubadas e cultivadas em uma temperatura e período de tempo desejados.

O método de tripsinização a frio tem várias vantagens

Maior rendimento de células viáveis, pois o dano celular é minimizado. O dano celular é minimizado por não usar etapas de centrifugação.
Método altamente conveniente.
Menos trabalhoso.

A principal limitação do método de tripsinização a frio é que grandes quantidades não podem ser usadas em uma instância.

Quais são as semelhanças entre tripsinização a quente e fria?

Os processos de tripsinização a quente e a frio usam a enzima tripsina para a desagregação das células.
Os processos de tripsinização a quente e a frio são usados em procedimentos de cultura de células para a desagregação de células.
Em ambos os procedimentos de tratamento de tripsinização quente e fria, as células são derivadas do sobrenadante.

Qual é a diferença entre tripsinização quente e fria?

Artigo Diff meio antes da tabela

Tripsinização quente vs fria
Tripsinização quente é o método de tratamento das células com tripsina em condições quentes a uma temperatura de 36,5-37 ⁰.	A tripsinização a frio é o processo de tratamento com tripsina que ocorre em condições mais frias, de preferência em gelo mantendo temperaturas muito baixas.
Protocolo
Os pedaços de tecido picados são mantidos a 37 ⁰ C continuamente ao longo do procedimento.	As peças de tecido cortadas são inicialmente mantidos a temperaturas gelado e, em seguida, mantida a 37 ⁰.
Temperatura
A tripsinização quente ocorre em 36,5 - 37 ⁰	A tripsinização a frio ocorre em temperaturas geladas.
Tempo consumido
Menor tempo necessário para todo o processo (cerca de 4 horas) de tripsinização a quente.	Mais tempo necessário (cerca de 6 a 24 horas) para a tripsinização a frio.
Rendimento de células viáveis
Baixo na tripsinização quente.	Alto na tripsinização a frio.
Uso de Centrifugação
A centrifugação é necessária para a desagregação das células na tripsinização quente.	A centrifugação não é necessária na tripsinização a frio.
Quantidade inicial de tecido para tripsinização
Uma quantidade maior de tecido pode ser usada na tripsinização a quente.	Uma quantidade menor de tecido pode ser usada na tripsinização a frio.
Danos celulares
Alta devido à centrifugação em tripsinização a quente.	Menos devido à tripsinização a frio.

Resumo - Tripsinização a quente vs. fria

A tripsinização é o método de usar a enzima de degradação da proteína tripsina para a desagregação e preparação de culturas de células primárias durante o processo de cultura de células. Existem duas técnicas principais de tripsinização com base nas temperaturas utilizadas durante o procedimento. Eles são tripsinização quente e fria. A tripsinização a quente é realizada a 37 ⁰ C, enquanto a tripsinização a frio é realizada em condições de gelo. Embora a tripsinização a frio leve mais tempo para ser concluída, diz-se que tem um maior rendimento de células viáveis. Isso se deve ao fato de que o dano celular é minimizado na tripsinização a frio, pois não usa etapas de centrifugação vigorosas. Esta é a diferença entre tripsinização quente e fria.