Diferença chave - tripsinização quente vs fria
A tripsinização a quente e a frio são dois métodos usados na desagregação enzimática de células em cultura de células animais. A principal diferença entre a tripsinização quente e fria, como os nomes sugerem, depende da temperatura na qual a tripsina é adicionada para a desagregação celular. A tripsinização a quente ocorre em condições de temperatura mais alta (36,5 - 37 0 C), enquanto a tripsinização a frio ocorre em condições de baixa temperatura.
Durante o processo de cultivo celular primário de células animais, três métodos principais são utilizados e têm se mostrado bem sucedidos. Os três métodos incluem a desagregação mecânica das células, a desagregação enzimática das células e a técnica de explante primário. A desagregação enzimática das células leva ao isolamento das células e é feita pela enzima de degradação da proteína tripsina. Portanto, esse processo é conhecido como Tripsinização. A tripsinização pode ser feita em duas condições diferentes, ou seja, tripsinização a quente e tripsinização a frio. A tripsinização a quente é o método de tratamento das células com tripsina em condições quentes a uma temperatura de 36,5 - 37 0C. A tripsinização a frio é o processo de tratamento com tripsina que ocorre em condições mais frias, de preferência em gelo mantendo temperaturas muito baixas.
CONTEÚDO
1. Visão geral e diferença principal
2. O que é tripsinização quente
3. O que é tripsinização fria
4. Semelhanças entre tripsinização quente e fria
5. Comparação lado a lado - tripsinização quente vs fria em forma tabular
6. Resumo
O que é tripsinização a quente?
A tripsinização pode ser feita para desagregar os componentes celulares a fim de isolar as células para produzir uma cultura de células primária. A tripsina é uma enzima de degradação de proteínas, e a mistura de enzimas usada na tripsinização pode ser um extrato bruto ou um produto purificado. O extrato bruto é considerado mais eficiente na lise de proteínas e na desintegração celular, pois contém outras enzimas degradativas.
A tripsinização a quente é o método enzimático mais comumente usado para a desagregação celular que ocorre em condições de temperatura mais alta. Antes do tratamento por tripsinização, o tecido desejado é picado em pedaços menores. Facilita o processo de desagregação fácil. O tecido picado é então lavado em um meio especial conhecido como meio de dissecção de sal basal.
Após a conclusão da etapa de lavagem, as células são transformadas em um frasco contendo a enzima ativa, que é a tripsina. Como esta técnica implica um protocolo de tripsinização quente, a tripsina é colocado a uma temperatura de cerca de 37 0 C, durante cerca de quatro horas.
Figura 01: Tripsina
Os conteúdos são misturados e agitados usando métodos de centrifugação para facilitar o protocolo e para acelerar o processo de desagregação. Uma vez atingido o tempo recomendado, as células podem ser derivadas do sobrenadante. As células derivadas do sobrenadante são então incubadas a uma determinada temperatura e tempo.
O que é tripsinização a frio?
A tripsinização a frio é o outro tipo de tripsinização que ocorre em condições de frio. Nessa técnica, as células que são picadas e lavadas são colocadas em frascos no gelo e depois embebidas em tripsina. O período de imersão é muito mais longo - cerca de 6 a 24 horas.
Após conclusão do procedimento de imersão, a tripsina é removido a partir do ligado de células, e as peças de tecido são incubadas a 37 0 C durante cerca de 20 - 30 minutos. A desagregação das células é realizada por pipetagem repetida da mistura de tecidos. Isso permitirá que as células se dissociem da membrana e cheguem ao sobrenadante. Uma vez que as células estão no sobrenadante, elas são incubadas e cultivadas em uma temperatura e período de tempo desejados.
O método de tripsinização a frio tem várias vantagens
- Maior rendimento de células viáveis, pois o dano celular é minimizado. O dano celular é minimizado por não usar etapas de centrifugação.
- Método altamente conveniente.
- Menos trabalhoso.
A principal limitação do método de tripsinização a frio é que grandes quantidades não podem ser usadas em uma instância.
Quais são as semelhanças entre tripsinização a quente e fria?
- Os processos de tripsinização a quente e a frio usam a enzima tripsina para a desagregação das células.
- Os processos de tripsinização a quente e a frio são usados em procedimentos de cultura de células para a desagregação de células.
- Em ambos os procedimentos de tratamento de tripsinização quente e fria, as células são derivadas do sobrenadante.
Qual é a diferença entre tripsinização quente e fria?
Artigo Diff meio antes da tabela
Tripsinização quente vs fria |
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| Tripsinização quente é o método de tratamento das células com tripsina em condições quentes a uma temperatura de 36,5-37 0. | A tripsinização a frio é o processo de tratamento com tripsina que ocorre em condições mais frias, de preferência em gelo mantendo temperaturas muito baixas. |
| Protocolo | |
| Os pedaços de tecido picados são mantidos a 37 0 C continuamente ao longo do procedimento. | As peças de tecido cortadas são inicialmente mantidos a temperaturas gelado e, em seguida, mantida a 37 0. |
| Temperatura | |
| A tripsinização quente ocorre em 36,5 - 37 0 | A tripsinização a frio ocorre em temperaturas geladas. |
| Tempo consumido | |
| Menor tempo necessário para todo o processo (cerca de 4 horas) de tripsinização a quente. | Mais tempo necessário (cerca de 6 a 24 horas) para a tripsinização a frio. |
| Rendimento de células viáveis | |
| Baixo na tripsinização quente. | Alto na tripsinização a frio. |
| Uso de Centrifugação | |
| A centrifugação é necessária para a desagregação das células na tripsinização quente. | A centrifugação não é necessária na tripsinização a frio. |
| Quantidade inicial de tecido para tripsinização | |
| Uma quantidade maior de tecido pode ser usada na tripsinização a quente. | Uma quantidade menor de tecido pode ser usada na tripsinização a frio. |
| Danos celulares | |
| Alta devido à centrifugação em tripsinização a quente. | Menos devido à tripsinização a frio. |
Resumo - Tripsinização a quente vs. fria
A tripsinização é o método de usar a enzima de degradação da proteína tripsina para a desagregação e preparação de culturas de células primárias durante o processo de cultura de células. Existem duas técnicas principais de tripsinização com base nas temperaturas utilizadas durante o procedimento. Eles são tripsinização quente e fria. A tripsinização a quente é realizada a 37 0 C, enquanto a tripsinização a frio é realizada em condições de gelo. Embora a tripsinização a frio leve mais tempo para ser concluída, diz-se que tem um maior rendimento de células viáveis. Isso se deve ao fato de que o dano celular é minimizado na tripsinização a frio, pois não usa etapas de centrifugação vigorosas. Esta é a diferença entre tripsinização quente e fria.
