Diferença chave - papel vs camada fina vs cromatografia em coluna
A cromatografia em papel, a cromatografia em camada fina e a cromatografia em coluna são três tipos de técnicas cromatográficas. A principal diferença entre a cromatografia em papel, a cromatografia em camada fina e a cromatografia em coluna baseia-se no tipo de fase estacionária usada na técnica de cromatografia. A cromatografia em papel usa um papel de celulose como fase estacionária, a cromatografia em camada fina usa alumina ou sílica gel como fase estacionária, enquanto a cromatografia em coluna usa uma coluna cheia com um material de matriz adequado como sua fase estacionária.
No processo de separação e identificação de biomoléculas como proteínas e carboidratos, a cromatografia é uma importante técnica biofísica utilizada. A cromatografia separa os compostos com base em sua solubilidade, tamanho e carga. Com base no mecanismo de separação, a cromatografia utiliza mecanismos como troca iônica, absorção, partição e exclusão por tamanho e existem três técnicas cromatográficas; a saber, papel, camada fina e cromatografia em coluna. A cromatografia em papel é baseada na adsorção sólido-líquido e na solubilidade do composto, e usa um papel de celulose como fase estacionária. A cromatografia em camada fina é baseada na adsorção sólido-líquido de moléculas. Tem uma fase estacionária que é normalmente feita de alumina ou sílica gel e a fase móvel que é o solvente. A cromatografia em coluna usa uma coluna empacotada com uma matriz que é usada para separar moléculas principalmente com base em seu tamanho, afinidade ou carga.
CONTEÚDO
1. Visão geral da cromatografia e diferença principal
2. O que é cromatografia em papel
3. O que é cromatografia em camada fina
4. O que é cromatografia em coluna
5. Semelhanças entre papel, camada fina e cromatografia em coluna
6. Comparação lado a lado - papel vs camada fina vs Cromatografia de coluna em forma tabular
7. Resumo
O que é cromatografia em papel?
A cromatografia em papel é o tipo mais simples de cromatografia usada e não é usada para pesquisas extensas. É usado principalmente em laboratórios de estudantes para identificar biomoléculas, como aminoácidos e carboidratos presentes nas misturas. A cromatografia em papel usa uma fase estacionária feita com papel celulose ou papel de filtro Whatman e uma fase móvel que geralmente é preparada com solventes orgânicos como n-butanol, etc. A fase estacionária é saturada com água, tornando a fase estacionária líquida. Assim, quando os compostos são manchados e deixados correr na presença da fase móvel, dependendo da solubilidade dos compostos, eles são separados. Assim, após o desenvolvimento do cromatograma, a coloração pode ser feita para determinar a execução do comprimento de cada composto. O fator de retenção pode então ser calculado.
Figura 01: Cromatografia de papel
A cromatografia em papel pode ser ainda classificada como cromatografia em papel ascendente e cromatografia em papel descendente, dependendo da direção do solvente em execução.
O que é cromatografia em camada fina?
A cromatografia em camada fina ou TLC é uma técnica comumente usada para identificar diferentes aminoácidos presentes em uma mistura ou para a identificação de proteínas. A técnica de separação é baseada na adsorção sólido-líquido. Durante a cromatografia em camada fina, uma placa feita de alumina ou sílica gel é usada como fase estacionária. A mistura de solventes varia conforme a necessidade e pode usar diferentes combinações de compostos orgânicos, tais como n-butanol, ácido acético e água para preparar o solvente. Os compostos a serem separados são colocados na placa e imersos na mistura de solventes. Uma vez que o solvente viaja com base na ação capilar dada pela placa, os compostos manchados na placa também se movem dependendo de sua solubilidade no solvente.
Figura 02: Cromatografia de camada fina
A detecção das manchas após o cromatograma é executada por diferentes procedimentos de coloração. Alguns usam a coloração com ninidrina, que é um método bastante tóxico de coloração. Cromatogramas de camada fina modernos usam técnicas de fluorescência para visualizar o cromatograma após a execução. Dependendo das distâncias percorridas, o tempo de retenção de cada composto pode ser calculado. Isso pode ser usado para identificar o tipo de composto separado com base na mistura usada. A TLC é usada principalmente para identificar aminoácidos em uma mistura de proteínas e também para separar diferentes tipos de monossacarídeos presentes em uma mistura.
O que é cromatografia em coluna?
Cromatografia de coluna é um termo amplo usado para descrever muitos tipos de técnicas de cromatografia que usam o método de separação baseado em coluna. Na cromatografia em coluna, uma coluna física é usada com um material de empacotamento para separar os compostos. A separação pode ser baseada em diferentes propriedades físicas exibidas pelos compostos. Essas propriedades podem ser a carga, o tamanho, a conformação 3D e a capacidade de ligação, etc. Assim, a coluna embalada com o material da matriz atua como a fase estacionária e o tampão de lavagem aplicado à coluna atua como a fase móvel.
Se as moléculas são separadas com base no tamanho, o material de empacotamento é embalado de uma maneira que deixa poros para os compostos passarem. Assim, as moléculas maiores que não podem fluir através dos poros são eluídas primeiro, enquanto as moléculas menores levam muito mais tempo para eluir.
Figura 03: Cromatografia de coluna
Se as moléculas são separadas com base em sua carga, a fase estacionária conterá um trocador de ânions ou cátions para o qual os compostos serão atraídos com base em sua carga. Assim, durante a etapa de lavagem, os compostos não ligados serão eluídos. Após a adição do tampão de eluição, os compostos carregados ligados serão eluídos. A detecção desses eluentes é baseada principalmente em técnicas espectrofotométricas.
Quais são as semelhanças entre a camada fina de papel e a cromatografia em coluna?
- Todas as três técnicas de cromatografia de coluna e camada fina de papel são usadas para a separação de biomoléculas, como aminoácidos, proteínas e carboidratos.
- As técnicas de cromatografia em coluna e camada fina de papel têm uma fase móvel e uma fase estacionária.
- As técnicas de cromatografia em coluna e camada fina de papel usam mecanismos biofísicos para separação.
Qual é a diferença entre camada fina de papel e cromatografia em coluna?
Artigo Diff meio antes da tabela
Papel vs Camada Fina vs Cromatografia em Coluna |
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| Cromatografia de Papel | A cromatografia em papel é uma técnica cromatográfica usada para separar compostos com base na adsorção líquido-líquido e na solubilidade do composto. Ele usa um papel de celulose como fase estacionária. |
| Cromatografia de camada fina | A cromatografia em camada fina é outra técnica cromatográfica baseada na adsorção sólido-líquido de moléculas. Possui uma fase estacionária feita de alumina ou sílica gel e um solvente como fase móvel, que é o solvente. |
| Cromatografia em coluna | A cromatografia em coluna usa uma coluna empacotada com uma matriz que é usada para separar moléculas principalmente com base em seu tamanho, afinidade ou carga. |
| Fase Estacionária | |
| Cromatografia de Papel | Papel feito de nitrocelulose de Whatman é usado como fase estacionária na cromatografia de papel. |
| Cromatografia de camada fina | Alumina ou sílica gel é usada como a fase estacionária da cromatografia em camada fina. |
| Cromatografia em coluna | Uma coluna cheia com material de empacotamento adequado é usada como fase estacionária na cromatografia de coluna. |
| Na fase móvel | |
| Cromatografia de Papel | O solvente corrente é a fase móvel da cromatografia em papel. |
| Cromatografia de camada fina | O solvente corrente é a fase móvel da cromatografia em camada fina. |
| Cromatografia em coluna | O tampão de lavagem é a fase móvel da cromatografia em coluna. |
| Mecanismos usados para separação | |
| Cromatografia de Papel | A cromatografia em papel é baseada na absorção sólido-líquido. |
| Cromatografia de camada fina | A cromatografia em camada fina é baseada na absorção sólido-líquido. |
| Cromatografia em coluna | A cromatografia em coluna é baseada na exclusão de tamanho, carga e forma. |
| Tampão de Eluição | |
| Cromatografia de Papel | Não exigido pela cromatografia em papel. |
| Cromatografia de camada fina | Não é necessário para cromatografia em camada fina. |
| Cromatografia em coluna | Requerido em cromatografia em coluna. |
| Detecção | |
| Cromatografia de Papel | Coloração e determinação do fator de retenção. |
| Cromatografia de camada fina | Coloração e determinação do fator de retenção. |
| Cromatografia em coluna | Determinação espectrofotométrica. |
Resumo - Camada Fina de Papel vs Cromatografia de Coluna
A cromatografia em papel, TLC e cromatografia em coluna são técnicas de separação usadas para separar biomoléculas como proteínas, aminoácidos e carboidratos (principalmente monossacarídeos). A cromatografia em papel usa um papel de celulose como fase estacionária, e o mecanismo de separação é baseado na adsorção sólido-líquido. TLC também usa mecanismos de adsorção sólido-líquido. As moléculas são separadas na fase estacionária, dependendo de sua solubilidade na fase móvel. A cromatografia em coluna usa propriedades físicas como tamanho, forma, carga e o peso molecular do composto para separar. A coluna embalada com o material da matriz atua como a fase estacionária, enquanto o tampão de lavagem atua como a fase solvente. Esta é a diferença entre uma camada fina de papel e cromatografia em coluna.
