PCR vs PCR em tempo real
PCR ou reação em cadeia da polimerase é uma descoberta revolucionada na biologia molecular moderna, que foi desenvolvida pela primeira vez pela química Kary Mullis em 1983. Ela permite que uma única sequência em um DNA complexo seja amplificada para análise. A ideia básica do PCR é que dois primers, que são complementares às fitas opostas de uma sequência de DNA, são orientados um para o outro; os primers produzem fitas complementares, cada uma contendo o outro primer. Portanto, o resultado é uma grande quantidade de uma seqüência correspondente ao DNA que se encontra entre os dois primers. A enzima DNA polimerase é usada para estender os primers na PCR. A DNA polimerase é uma enzima termoestável e tem a capacidade de sobreviver em altas temperaturas (94 a 95 ° C) usadas para desnaturação do DNA molde.
A PCR envolve três etapas, a saber, rodadas repetidas de desnaturação, anelamento de primers e síntese de DNA. Uma máquina termocicladora é usada para realizar essa reação, de modo que possa ser programada para alterar as temperaturas de forma rápida e precisa. As aplicações do PCR são investigações criminais, impressão digital de DNA, detecção de patógenos e análise de DNA de espécies humanas primitivas.
O que é PCR convencional?
Existem três estágios principais de PCR convencional, a saber; Estágio de amplificação de DNA, separação de PCR e detecção de produtos. A separação dos segmentos de DNA é normalmente feita por eletroforese em gel de agarose. Os produtos são então corados com brometo de etheiduim. Finalmente, a detecção é alcançada pela visualização de bandas em géis sob luz ultravioleta. Portanto, os resultados finais da PCR convencional não são expressos em números. Normalmente, o PCR convencional só é capaz de detectar um único parâmetro.
O que é PCR em tempo real?
O PCR em tempo real pode detectar a amplificação de produtos, à medida que os produtos são sintetizados. Com o desenvolvimento da tecnologia, o PCR tornou-se uma técnica muito popular, principalmente para a detecção e identificação de bactérias em alimentos. O PCR em tempo real usa um sistema de corante fluorescente e um termociclador equipado com capacidade de detecção fluorescente.
Qual é a diferença entre PCR convencional e PCR em tempo real?
• A PCR convencional é mais demorada, pois usa eletroforese em gel para analisar os produtos amplificados da PCR. Em contraste, a PCR em tempo real consome menos tempo, pois pode detectar amplificações durante as fases iniciais da reação.
• A PCR em tempo real coleta dados na fase de crescimento exponencial da PCR, enquanto a PCR tradicional coleta dados no ponto final da reação.
• Os resultados do ponto final da PCR convencional podem não ser muito precisos, mas os resultados da PCR em tempo real são muito precisos.
• O PCR em tempo real é mais sensível do que o PCR convencional.
• O PCR convencional tem resolução muito baixa, enquanto o PCR em tempo real pode detectar poucas alterações devido à alta resolução.
• A detecção de ponto final de PCR convencional tem uma faixa dinâmica curta, enquanto a detecção de PCR em tempo real tem uma ampla faixa dinâmica.
• Ao contrário da PCR convencional, as técnicas de detecção automatizada são encontradas na PCR em tempo real.
• O PCR convencional é altamente sofisticado e exige mais mão de obra do que o PCR em tempo real.
• Ao contrário da PCR em tempo real, a PCR convencional não consegue discriminar entre bactérias mortas e vivas.
• A PCR em tempo real usa um sistema de corante fluorescente para detectar os produtos, enquanto a PCR convencional usa brometo de etídio e luz UV para visualizar bandas no meio de gel de agarose.
