Diferença Chave - Extração de DNA vs RNA
O estudo do DNA e do RNA são aspectos vitais para a compreensão dos conceitos básicos de biologia molecular, biotecnologia e genética. A extração de amostras puras de DNA e RNA são necessárias para a realização de procedimentos experimentais durante esses estudos. A principal diferença entre a extração de DNA e RNA é que o processo de extração de DNA purifica o DNA, enquanto a extração de RNA purifica o RNA. O processo de extração de DNA tem três etapas diferentes: lise celular e catabolismo de lipídios e proteínas da membrana, aglomeração de catabólitos por solução salina concentrada e precipitação de DNA com etanol. O procedimento de três etapas pode consistir em duas etapas opcionais. O processo de purificação de RNA consiste em quatro etapas diferentes: adição de tiocianato de guanídio para lise celular, desnaturação de proteínas, incluindo ribonucleases,separação do RNA pela adição de clorofórmio e fenol e lavagem do precipitado com etanol.
CONTEÚDO
1. Visão geral e diferença principal
2. O que é extração de DNA
3. O que é extração de RNA
4. Semelhanças entre DNA e extração de RNA
5. Comparação lado a lado - extração de DNA vs RNA em forma tabular
6. Resumo
O que é extração de DNA?
A extração de DNA é um processo físico e químico usado para purificar o DNA de uma amostra. A extração de DNA é um aspecto importante no contexto da biologia molecular e das ciências forenses. O processo consiste em três etapas básicas. Inicialmente, as células de interesse devem ser obtidas. Em seguida, a lise celular é facilitada para quebrar a membrana celular, que abre a célula e expõe o citoplasma junto com o DNA. Surfactantes ou outros detergentes podem ser utilizados para lisar os lipídios da membrana celular enquanto as proteínas presentes são catabolizadas por proteases. Este é um passo opcional. Uma vez que a célula é lisada, a aglutinação das moléculas catabolizadas é facilitada por soluções salinas concentradas. É seguido pela centrifugação da solução que separa os aglomerados de resíduos do DNA. Nesta fase,o DNA diferenciado é misturado aos reagentes e sais usados durante o ciclo celular.
Figura 01: Extração de DNA
A fim de purificá-lo ainda mais, as seguintes etapas podem ser usadas. Um método é a precipitação com etanol, que envolve a mistura de etanol gelado com a amostra de DNA separada. O DNA é insolúvel em álcool e, portanto, produz um pellet devido à agregação das moléculas de DNA. O acetato de sódio é adicionado neste processo para aumentar o grau de precipitação, aumentando a força iônica. Além do processo de precipitação com etanol, o processo de extração com fenol-clorofórmio também pode ser induzido. Neste método, o fenol desnatura as proteínas presentes na amostra. Uma vez centrifugadas, as proteínas desnaturadas permanecerão na fase orgânica, enquanto as moléculas de DNA que são misturadas ao clorofórmio estarão presentes na fase aquosa. O clorofórmio remove os resíduos de fenol. Assim que a extração for concluída,O DNA é mantido dissolvido em tampão TE ou água ultra pura.
O que é extração de RNA?
A purificação do RNA é um processo pelo qual o RNA é purificado de uma amostra biológica. Devido à presença da ribonuclease nas células e tecidos, esse processo é complicado. A enzima ribonuclease tem a capacidade de degradar o RNA rapidamente. A natureza química das ribonucleases é extremamente estável e é difícil inativá-las. Neutralizar as ribonucleases é uma opção. Uma vez que esta enzima é onipresente nas células e tecidos, técnicas especiais são desenvolvidas para extração de RNA. Dentre os muitos métodos, o método comum é a extração de tiocinato-fenol-clorofórmio de guanidínio.
Figura 02: Extração de RNA
O método de extração de tiocinato-fenol-clorofórmio de guanidínio depende da centrifugação e separação de fases. A mistura a ser centrifugada consiste na amostra aquosa e uma solução saturada de água que consiste em fenol e clorofórmio. Uma vez centrifugada, a solução consiste em uma fase aquosa superior e uma fase orgânica inferior sob condições de pH neutro (pH 7-8). O RNA está presente na fase aquosa. A fase orgânica consiste tipicamente em proteínas dissolvidas em fenol e lipídios dissolvidos em clorofórmio. Um agente caotrópico (uma molécula que tem a capacidade de quebrar as ligações de hidrogênio entre as moléculas de água) é adicionado; isso é conhecido como tiocianato de guanidínio. Este agente tem a capacidade de desnaturar proteínas que incluem ribonucleases que podem degradar o RNA e está envolvido na lise celular. Ele também separa o rRNA das proteínas ribossômicas. A etapa final da purificação do RNA é a lavagem da precipitação da fase aquosa com etanol. O RNA também pode ser purificado usando nitrogênio líquido.
Quais são as semelhanças entre extração de DNA e RNA?
- Ambos os processos de extração utilizam produtos químicos prejudiciais, como fenol e clorofórmio.
- A centrifugação é uma técnica essencial para ambos os processos.
- O etanol é usado para lavar o precipitado e para obter DNA ou RNA purificado.
Qual é a diferença entre extração de DNA e RNA?
Artigo Diff meio antes da tabela
Extração de DNA vs RNA |
|
| A extração de DNA é um processo que extrai DNA de um organismo ou amostra. | A extração de RNA é um processo que extrai o RNA de uma amostra. |
| Passos | |
| O processo de extração de DNA é composto de três etapas diferentes com duas etapas opcionais. | O processo de extração de RNA é composto por quatro etapas diferentes. |
| Reagentes | |
| Surfactantes, proteases (opcional), álcool, clorofórmio, fenol, acetato de sódio são usados para extração de DNA. | Tiocianato de guanídio, clorofórmio, fenol, etanol são usados para extração de RNA. |
Resumo - Extração de DNA vs RNA
A extração de DNA e RNA são aspectos vitais dos procedimentos experimentais para o estudo da biologia molecular, genética e biotecnologia. Ambos os processos envolvem reagentes semelhantes, mas a extração de RNA utiliza um reagente especial conhecido como tiocianato de Guanidium que diminui a atividade das ribonucleases. Esta é a principal diferença entre extração de DNA e RNA.
Baixe a versão em PDF da extração de DNA vs RNA
Você pode baixar a versão PDF deste artigo e usá-la para fins off-line de acordo com a nota de citação. Faça o download da versão em PDF aqui. Diferença entre extração de DNA e RNA
