Diferença principal - Gel de empilhamento vs gel de separação
Os termos gel de empilhamento e gel de separação são usados para explicar a técnica de SDS-PAGE. SDS-PAGE ou eletroforese em gel de dodecilsulfato de sódio-poliacrilamida é uma técnica de laboratório usada para separar moléculas de proteínas com base em seus pesos moleculares. A teoria por trás da técnica é que proteínas com diferentes pesos moleculares apresentam diferentes taxas de migração; as moléculas de baixo peso molecular migram mais rápido, enquanto as de alto peso molecular migram lentamente. O meio para migração é um gel. Existem dois tipos de géis denominados gel de empilhamento e gel de separação. A principal diferença entre o gel de empilhamento e o gel de separação é que o pH do gel de empilhamento é 6,8, enquanto o pH do gel de separação é 8,8.
CONTEÚDO
1. Visão geral e diferença principal
2. O que é o gel de empilhamento
3. O que é o gel de separação
4. Relação entre o gel de empilhamento e o gel de separação
5. Comparação lado a lado - Gel de empilhamento vs gel de separação em forma tabular
6. Resumo
O que é Stacking Gel?
O gel de empilhamento é um gel de poliacrilamida de baixa concentração que é colocado no topo de um gel de resolução mais concentrado (gel de separação) na técnica de SDS-PAGE. O gel de empilhamento é usado para melhorar a resolução da eletroforese. A resolução aumenta devido à diferença entre as concentrações do gel de empilhamento e do gel de resolução que afetam as proteínas da amostra. Visto que a concentração de poliacrilamida no gel de empilhamento é baixa, o tamanho dos poros é maior. Isso também ajuda a aumentar a separação.
O gel de empilhamento é um gel de poliacrilamida solto com poros grandes de cerca de 7% de poliacrilamida. Esses poros não atuam como uma barreira considerável para grandes moléculas de proteína. Conseqüentemente, este gel afeta ligeiramente a mobilidade dessas proteínas. Isso faz a separação de acordo com a mobilidade e o tamanho da proteína, concentrando-as entre dois géis.
Figura 01: Gel de acrilamida SDS-PAGE
O pH do gel de empilhamento é 6,8. Seu pH é mais ácido do que o do gel de resolução em 2 unidades de pH. Este pH implica uma menor força iônica, portanto, uma maior resistência elétrica. Isso provoca a mobilidade das proteínas do que outras partículas carregadas presentes no gel.
O que é o gel de separação?
O gel de separação ou o gel de resolução de uma técnica SDS-PAGE é um gel de poliacrilamida altamente concentrado que é colocado no topo do gel de empilhamento de baixa concentração. O gel de separação contém uma grande quantidade de poliacrilamida (10%). O pH deste gel é mantido como pH = 8,8, que é um nível de pH mais alto do que o do gel de empilhamento.
Figura 02: Um aparelho de eletroforese em gel
Quando as moléculas de proteína alcançam o gel de separação, a migração dessas moléculas é retardada porque o gel de separação é um gel de alta concentração com um tamanho de poro pequeno que pode atuar como uma barreira considerável para o movimento das moléculas de proteína. Essa desaceleração permite que as outras proteínas migrem lentamente para se recuperar, resultando em uma banda estreita e concentrada entre os dois géis.
Qual é a relação entre o gel de empilhamento e o gel separador?
Os tipos de gel de empilhamento e gel de separação são usados no mesmo aparelho
Qual é a diferença entre o gel de empilhamento e o gel de separação?
Artigo Diff meio antes da tabela
Gel de empilhamento vs gel de separação |
|
| O gel de empilhamento é um gel de poliacrilamida de baixa concentração que é colocado no topo de um gel de resolução mais concentrado (gel de separação) na técnica de SDS-PAGE. | O gel de separação ou o gel de resolução de uma técnica de SDS-PAGE é um gel de poliacrilamida altamente concentrado que é colocado no topo de um gel de empilhamento de baixa concentração. |
| Colocação | |
| O gel de empilhamento é colocado no gel de resolução (separação). | O gel de separação é colocado no fundo do recipiente usado para a eletroforese em gel. |
| Concentração | |
| A concentração do gel de empilhamento é alta. | A concentração do gel de separação é baixa. |
| Teor de poliacrilamida | |
| O gel de empilhamento contém cerca de 7% de poliacrilamida. | O gel de separação contém cerca de 10% de poliacrilamida. |
| pH | |
| O pH do gel de empilhamento é 6,8. | O pH do gel de separação é 8,8. |
| Tamanho de Poro | |
| Grandes tamanhos de poros estão presentes no gel de empilhamento. | Os tamanhos de poros pequenos estão presentes no gel de separação. |
| Resolução | |
| O gel de empilhamento proporciona melhor resolução. | O gel de separação dá uma resolução pobre. |
Resumo - Gel de empilhamento vs gel de separação
O gel de empilhamento e o gel de separação são dois tipos de géis de poliacrilamida usados para obter uma melhor separação das moléculas de proteína em uma determinada amostra. A diferença entre o gel de empilhamento e o gel de separação é que o pH do gel de empilhamento é 6,8, enquanto o pH do gel de separação é 8,8.
