Diferença chave - Clonagem vs Subclonagem
A clonagem e a subclonagem são procedimentos biológicos moleculares que criam células ou organismos geneticamente idênticos que possuem o DNA ou gene de interesse. A clonagem é uma técnica que envolve a inserção do gene ou DNA interessado em um vetor, a sua replicação dentro de uma bactéria hospedeira e a produção de células ou organismos que são cópias exatas da composição genética. A subclonagem é uma técnica que envolve a inserção do gene de interesse, já inserido em um vetor, em um vetor secundário, sua replicação em uma bactéria hospedeira e a produção de cópias geneticamente idênticas de células ou organismos. A principal diferença entre clonagem e subclonagem é que, na clonagem, o gene de interesse, uma vez ligado a um vetor, continua o processo de clonagem enquanto, na subclonagem,o gene de interesse já clonado é separado do vetor original e inserido novamente em um vetor receptor e continua o processo.
CONTEÚDO
1. Visão geral e principais diferenças
2. O que é clonagem
3. O que é subclonagem
4. Comparação lado a lado - Clonagem versus subclonagem
5. Resumo
O que é clonagem?
A clonagem é o procedimento que produz organismos ou células geneticamente idênticas. Na natureza, a clonagem acontece por meio da reprodução assexuada. Quando não há recombinação ou alteração genética, as células-filhas recebem a mesma composição genética da mãe. Organismos procarióticos e eucarióticos criam clones por fissão binária, brotamento, mitose, etc. Em biologia molecular, clonar genes ou fragmentos específicos de DNA é um método popular para estudar a estrutura e função daquela seção de DNA em particular.
O principal objetivo da clonagem molecular é fazer milhões de cópias de células geneticamente idênticas ou organismos portadores do fragmento de DNA de interesse (principalmente genes). Ele cria organismos com cópias genéticas exatas de outro. Primeiramente, genes específicos são clonados em estudos moleculares para obter informações estruturais e funcionais e para sequenciamento de DNA. Além disso, para a produção de proteínas ou produtos específicos em grande escala, a clonagem é amplamente utilizada.
Procedimento de Clonagem
As etapas básicas do procedimento de clonagem são as seguintes.
- Identificação e isolamento do gene de interesse. (Amplificação do gene de interesse por PCR).
- Digestão de restrição do gene de interesse (a endonuclease de restrição corta o gene).
- Restrição da digestão do DNA do vetor. (O DNA do vetor também é cortado usando a mesma endonuclease de restrição).
- Inserção do gene no vetor e formação da molécula recombinante.
- Transformação do vetor recombinante em uma bactéria hospedeira.
- Isolamento e identificação das bactérias transformadas (o vetor plasmídeo deve conter um gene selecionável, mais comumente um gene de resistência a antibióticos para a triagem de bactérias transformadas).
- Expressão de genes recombinantes no hospedeiro.
Figure_01: Procedimento de Clonagem
O que é subclonagem?
A subclonagem é um procedimento de mover um gene de interesse de um vetor para outro vetor para ver a expressão do gene para obter a funcionalidade desejada do gene. Neste método, dois vetores estão envolvidos; a saber, vetor pai e vetor de destino. As inserções clonadas são movidas novamente para um segundo vetor na subclonagem. O objetivo de transferir o gene do primeiro vetor para o segundo vetor é obter algo que não poderia ser feito pelo primeiro vetor ou separar novamente um gene dentro do fragmento de DNA já clonado e expressá-lo sozinho. As enzimas de restrição são usadas neste procedimento no início.
Procedimento de Subclonagem
As etapas básicas de subclonagem são as seguintes.
- Com a ajuda de endonucleases de restrição, separação do DNA de interesse no plasmídeo doador (vetor pai).
- Amplificação do DNA de interesse por PCR.
- Purificação do produto de PCR (DNA de interesse) por eletroforese em gel.
- Abertura do plasmídeo receptor pelas mesmas endonucleases de restrição usadas para separar o DNA de interesse no plasmídeo parental.
- Ligação do DNA de interesse (gene) no plasmídeo receptor para criar o plasmídeo subclonado.
- Transformação do vetor subclonado em uma bactéria hospedeira competente.
- Rastreio de células transformadas.
- Purificação do DNA de plasmídeo e uso para sequenciamento de DNA ou expressão dos genes para obter os produtos desejados.
A subclonagem é realizada em ocasiões de isolamento de um gene do grupo de genes clonados ou quando o gene de interesse é necessário para ser transferido para um plasmídeo útil para ver a função exata do gene de interesse.
Figura_02: Procedimento de Subclonagem
Qual é a diferença entre Clonagem e Subclonagem?
Artigo Diff meio antes da tabela
Clonagem vs Subclonagem |
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| A clonagem é o procedimento que produz organismos ou células geneticamente idênticas. | A subclonagem é um procedimento de mover um gene de interesse de um vetor para outro vetor para ver a expressão do gene para obter a funcionalidade desejada do gene. |
| Processo | |
| Separar o DNA de interesse do organismo e inserir uma vez em um vetor e clonar | O DNA já clonado é separado do primeiro vetor e inserido em um segundo vetor e clonado. |
| Inserir movimento via vetores | |
| Não move inserções (DNA de interesse) de um vetor para outro vetor. | Mova as inserções do vetor pai para o vetor de destino. |
Resumo - Clonagem vs Subclonagem
A clonagem cria células ou organismos geneticamente idênticos com o gene inserido ou DNA de interesse. Ele prossegue através da separação e inserção do DNA de interesse em um vetor e expressão dentro de uma bactéria hospedeira. A subclonagem compartilha etapas semelhantes com a clonagem. No entanto, na subclonagem, o fragmento de DNA já clonado (gene de interesse) é inserido em um vetor e transformado em uma bactéria hospedeira. Essa é a principal diferença entre clonagem e subclonagem.
