Diferença chave - T4 vs T7 DNA Ligase
A DNA ligase é uma importante enzima usada em técnicas de biologia molecular. Ele funciona como uma cola molecular para unir nucleotídeos formando ligações fosfodiéster entre os nucleotídeos. As ligações fosfodiéster são formadas entre a extremidade 3 'hidroxila da porção de açúcar e o grupo fosfato da extremidade 5'. DNA ligase é vital no processo de replicação para juntar os fragmentos de Okazaki da fita retardada e durante os mecanismos de reparo de DNA e experimentos de clonagem in vitro para juntar o gene desejado de interesse para o genoma do vetor. Existem duas principais DNA ligases usadas atualmente por biólogos moleculares: T4 e T7 DNA ligases. T4 DNA ligase é uma das primeiras enzimas a ser isolada do bacteriófago T4. T7 DNA ligase, que é uma proteína menor, é uma enzima isolada do bacteriófago T7. Esta é a principal diferença entre as ligases de DNA T4 e T7.
CONTEÚDO
1. Visão geral e diferença principal
2. Qual é a ação da DNA ligase
3. O que é T4 DNA ligase
4. O que é T7 DNA ligase
4. Semelhanças entre T4 e T7 DNA ligase
5. Comparação lado a lado - T4 vs T7 DNA ligase na forma tabular
6. Resumo
Qual é a ação da DNA ligase?
A ligação do DNA ocorre em uma reação de três etapas. A primeira etapa é um ataque nucleofílico ao alfa-fósforo do ATP, gerando um intermediário enzima-adenilato covalente no qual o AMP está ligado ao nitrogênio da cadeia lateral terminal da lisina. Na segunda etapa, ocorre um ataque nucleofílico ao fósforo da enzima-adenilato pelo substrato de DNA terminado em 5'-fosfato, liberando lisina e formando DNA-adenilato. Na etapa final, o adenilato de DNA é atacado por 3'-OH de outra fita de DNA, liberando AMP e se juntando aos polinucleotídeos.
O que é T4 DNA Ligase?
A T4 Ligase foi a primeira ligase a ser isolada e identificada por Meselson, Weigle e Kellenberger e foi a primeira ligase comercial produzida. T4 DNA ligase é uma enzima dependente de ATP que catalisa a formação da ligação fosfodiéster. É uma única cadeia polipeptídica com 487 resíduos de aminoácidos e tem um peso molecular de cerca de 77 kDa. O pH ideal para sua atividade está na faixa de 7,5 - 8.
Figura 01: T4 DNA Ligase
A T4 DNA Ligase, como o próprio nome sugere, está presente no bacteriófago T4 e foi isolada quando o fago produziu a enzima após infecção com E. coli. A enzima liga duplexes de DNA de fita dupla com extremidades cegas e os fragmentos a serem ligados devem estar próximos uns dos outros.
O que é T7 DNA Ligase?
A ligase T7 é uma proteína de 41 kDa produzida pelo Bacteriófago T7 e é isolada infectando células de E. coli. A principal função da ligase T7 é ligar duplexes de DNA através de ligações fosfodiéster e juntar fragmentos próximos de DNA durante os experimentos de clonagem. O pH ideal para a T7 DNA ligase está na faixa de 7,0 - 7,2. A ligase T7 é dependente de ATP. As ligases de DNA T7 também são capazes de hibridar DNA e RNA híbridos, dando origem a conformações anormais durante a transcrição; no entanto, esse fenômeno ainda está sendo pesquisado por estudos in vitro.
Quais são as semelhanças entre T4 e T7 DNA ligase?
- T4 e T7 DNA Ligase participam de uma reação de ligação por anelamento de duplexes de DNA através da formação de ligações fosfodiéster entre a extremidade 3 'OH e a extremidade 5' de fosfato do fragmento de DNA.
- Ambas as enzimas ligam duplexes de DNA de extremidades cegas que estão muito próximas uma da outra.
- Ambas as enzimas são dependentes de ATP.
- Essas enzimas são isoladas infectando células de E. coli com o bacteriófago específico.
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As aplicações de ambas as enzimas incluem:
- Clonagem molecular - para ligar o gene de interesse ao vetor
- Reparo de DNA - para reparar nichos de fita dupla
- Replicação de DNA in vitro
- Reação em cadeia da ligase
Qual é a diferença entre T4 e T7 DNA ligase?
Artigo Diff meio antes da tabela
T4 vs T7 DNA Ligase |
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| T4 DNA Ligase é o tipo de DNA ligase isolado do bacteriófago T4 e está envolvido na ligação de fragmentos de DNA adjacentes por meio da formação de ligações fosfodiéster. | T7 DNA Ligase é um tipo de DNA ligase isolado do bacteriófago T7 e está envolvido na ligação de fragmentos de DNA adjacentes por meio da formação de ligações fosfodiéster. |
| Tamanho da proteína | |
| O tamanho da T4 DNA ligase é 77 kDa - maior em comparação com a T7 DNA ligase. | O tamanho da T7 DNA ligase é 41 kDa. |
| PH ótimo | |
| A faixa de pH que funciona com a T4 DNA ligase é 7,5 - 8,0. | A faixa de pH que funciona com a T7 DNA ligase é 7,0 - 7,2. |
Resumo - T4 vs T7 DNA Ligase
As DNA ligases são uma importante classe de enzimas envolvidas na clonagem molecular para produzir moléculas de DNA recombinante contendo o gene de interesse. A reação de ligação é uma reação que utiliza energia e há novos estudos em andamento para melhorar a precisão por meio da modulação das ligases disponíveis. T4 e T7 DNA ligases são dois tipos de importantes enzimas DNA ligase usadas em técnicas de biologia molecular. A ligase de DNA T7 também é resultado de uma pesquisa baseada na ligase primária isolada de E. coli infectada por T4. O T7 é retratado com mais eficiência e precisão no desempenho de sua função devido ao seu tamanho menor. Esta é a diferença entre T4 e T7 ligase.
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