Diferença chave - marcador selecionável vs gene repórter
A técnica de engenharia genética é usada para transferir genes importantes de um organismo para outro. A inserção de um gene estranho no genoma de outro organismo e torná-lo expresso dentro da célula hospedeira são as etapas mais difíceis na transferência de genes. Para detectar o sucesso do processo de transformação, um marcador selecionável e um gene repórter são usados na molécula recombinante. Um marcador selecionável é uma sequência de DNA ou um gene que expressa e seleciona as células transformadas das células não transformadas. Um gene repórter é outro gene que é usado para distinguir células transformadas e para quantificar ou detectar como o gene inserido funciona dentro do hospedeiro. A principal diferença entre o marcador selecionável e o gene repórter é que o marcador selecionável é usado para rastrear as células não transformadas e para sinalizar as células transformadas enquanto o gene repórter é usado para quantificar o nível de expressão do gene no hospedeiro.
CONTEÚDO
1. Visão geral e diferença principal
2. O que é marcador selecionável
3. O que é gene Reporter
4. Comparação lado a lado - Marcador selecionável vs Gene repórter
5. Resumo
O que é um marcador selecionável?
Na engenharia genética, o gene de interesse é inserido em um vetor adequado e transformado em organismos hospedeiros. No entanto, a transformação é bem-sucedida apenas nas células hospedeiras competentes, e existe a possibilidade de as células hospedeiras rejeitarem a captação de DNA estranho. Portanto, a diferenciação das células transformadas e não transformadas é importante para continuar com a experimentação adicional. Assim, os pesquisadores incorporam um gene marcador selecionável para vetor para fácil seleção das células transformadas de células não transformadas. Um marcador selecionável é uma sequência de DNA, especialmente um gene útil na identificação das células transformadas. Este gene marcador exibe uma característica que se adequa a uma seleção artificial de células transformadas de células não transformadas em um meio.
Os marcadores selecionáveis mais comuns usados em biologia molecular são genes resistentes a antibióticos. Um gene de resistência a antibióticos é inserido no vetor e transformado em células hospedeiras, especialmente para a bactéria hospedeira. Esse antibiótico específico é incorporado ao meio de cultivo da bactéria. Devido à presença do marcador seletivo, nas condições seletivas, apenas as células que contêm o marcador selecionável apropriado podem sobreviver. As células não transformadas são incapazes de crescer no meio contendo antibiótico. Portanto, devido ao marcador selecionável que é resistente a antibióticos, as células transformadas são facilmente identificadas.
Genes que conferem características aos antimetabólitos, os herbicidas são usados como marcadores seletivos em vetores de clonagem na engenharia genética de plantas. No entanto, essa cotransformação de marcadores seletivos em organismos geneticamente modificados tem efeitos negativos sobre o meio ambiente e o ser humano. A liberação de bactérias resistentes a antibióticos pode aumentar a resistividade aos antibióticos de patógenos humanos. Pode contaminar o produto ou biomassa por antibióticos e pode perder a pressão seletiva como resultado da degradação e inativação dos antibióticos.
Figura 01: Vetor plasmídeo para transferência de genes com marcador selecionável
O que é um gene Reporter?
Genes repórteres são genes que permitem a detecção ou medição da expressão do gene inserido. Esses genes repórter podem ser ligados a sequências regulatórias do gene de interesse para sinalizar a localização ou os níveis de expressão. Portanto, durante a expressão de genes sob o mesmo promotor, eles são transcritos em uma única sequência de mRNA e, em seguida, traduzidos em uma proteína que pode indicar o nível de expressão do gene.
Os genes repórteres são de vários tipos e contêm características visualmente identificáveis que geralmente estão envolvidas em proteínas fluorescentes e luminescentes. Genes que codificam proteínas e enzimas fluorescentes, convertem substratos invisíveis em produtos luminescentes ou coloridos, sinalizando a expressão gênica bem-sucedida e dando a oportunidade de quantificação da expressão gênica.
Figura 02: Expressão do gene repórter
Qual é a diferença entre Selectable Marker e Reporter Gene?
Artigo Diff meio antes da tabela
Marcador selecionável vs gene repórter |
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| O marcador selecionável é um tipo de sequência de DNA que ajuda a distinguir células transformadas de células não transformadas. | O gene repórter é um gene que ajuda a quantificar a expressão do gene desejado inserido na célula hospedeira. |
| Natureza das unidades produzidas | |
| Os genes são codificados com características que auxiliam na seleção artificial em meios de cultivo. | Os genes são codificados com características visualmente identificáveis. |
| Uso | |
| Genes de resistência a antibióticos, genes de antimetabólitos, genes de resistência a herbicidas, etc. são exemplos de marcadores selecionáveis. | Os genes codificam para proteína fluorescente verde, β-glucuronidase, cloranfenicol acetiltransferase, proteína fluorescente vermelha, etc. são exemplos. |
Resumo - Marcador selecionável vs gene repórter
Os marcadores selecionáveis permitem que as células transformadas cresçam em meio seletivo dosado com um antibiótico ou herbicida específico. Eles são usados para a seleção precoce de células transformadas. Genes repórteres são usados para quantificar o nível de expressão do gene desejado inserido. Eles também permitem a diferenciação de células transformadas e não transformadas. Esta é a diferença entre marcador selecionável e gene repórter. Tanto o marcador selecionável quanto o gene repórter são considerados marcadores importantes na engenharia genética.
