Diferença principal - Ligadura de ponta romba vs pegajosa
Endonucleases de restrição são enzimas específicas que cortam o DNA de fita dupla (dsDNA). Eles também são conhecidos como tesouras moleculares em biologia molecular. As enzimas de restrição são capazes de reconhecer sequências curtas específicas do dsDNA, conhecidas como sítios de reconhecimento, e clivar fosfodiéster e ligações de hidrogênio para abrir fitas duplas. Como resultado da clivagem por essas enzimas, os fragmentos de DNA são produzidos com diferentes tipos de extremidades, como extremidades adesivas e extremidades cegas. DNA ligase é uma enzima usada em biologia molecular para unir duas fitas adjacentes de DNA formando novas ligações. A etapa é conhecida como ligação e, de acordo com o tipo de extremidade do DNA ligada, elas podem ser chamadas de ligação de extremidade romba e ligação de extremidade pegajosa. A principal diferença entre a ligação da extremidade romba e pegajosa é que a ligação da extremidade cega ocorre entre fragmentos de DNA que contêm duas extremidades cegas, enquanto a ligação da extremidade pegajosa ocorre entre as saliências 5 'e 3'. Comparada à ligadura de extremidade romba, a ligadura de extremidade pegajosa é mais eficiente e estável.
ÍNDICE
1. Overview and Key Diferença
2. Qual é Blunt End ligadura
3. O que é pegajoso End ligadura
4. Side by Side Comparação - Blunt vs Fixo End ligadura
5. Resumo
O que é uma ligadura de ponta cega?
Algumas endonucleases de restrição podem cortar o DNA nas bases opostas e produzir fragmentos de DNA de extremidade cega. Essas enzimas são conhecidas como cortadores de ponta cega; eles se clivam diretamente até o meio do local de restrição, sem deixar bases pendentes de fita simples. Extremidades cegas também são conhecidas como extremidades não salientes, uma vez que não têm bases salientes de 3 'e 5' nas extremidades. Ambas as fitas terminam em pares de bases em extremidades cegas. As enzimas de corte de ponta romba comuns são EcoRV HaeIII, AluI e SmaI.
A ligadura de extremidade cega está envolvida entre duas extremidades cegas. Não é uma ligadura de bases salientes. Esta ligadura é menos eficiente do que ligadura de extremidade pegajosa. No entanto, em algumas ocasiões, a ligação da extremidade romba torna-se mais vantajosa do que a ligação da extremidade pegajosa, especialmente ao ligar produtos de PCR. Os produtos de PCR são sempre produzidos com extremidades cegas. A ligação de extremidade cega não requer extremidades complementares no DNA para a ligação.
Figura 01: Produção de ponta cega pela enzima Eco RV
O que é uma ligadura pegajosa?
Algumas endonucleases de restrição são capazes de cortar o dsDNA, deixando um pedaço saliente de DNA de fita simples no final. Essas extremidades são conhecidas como extremidades pegajosas ou salientes. A ligação da extremidade pegajosa ocorre entre dois fragmentos de DNA que contêm saliências correspondentes porque as extremidades pegajosas possuem bases desemparelhadas e requerem bases complementares para formar ligações. Portanto, é necessário usar a mesma enzima de restrição para ambas as fontes de DNA para produzir os fragmentos de ligação correspondentes.
A ligação da extremidade pegajosa é mais eficiente e muitas vezes altamente desejável em processos de clonagem. Existem várias enzimas de restrição que produzem extremidades pegajosas. Eles são EcoRI, BamHI, HindIII etc.
Figura 02: Produção final pegajosa pela enzima Eco RI
Qual é a diferença entre Blunt e Sticky End Ligation?
Artigo Diff meio antes da tabela
Ligadura Blunt vs Sticky End |
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| A ligação de extremidade cega ocorre entre dois fragmentos de DNA de extremidade cega. | A ligação da extremidade pegajosa ocorre entre dois fragmentos de DNA correspondentes com extremidades pegajosas. |
| Enzimas | |
| Os cortadores de ponta cega produzem pontas cegas. | Os cortadores de pontas pegajosas produzem pontas pegajosas ou coesivas. |
| Requisito de extremidades correspondentes | |
| Não requer fragmentos correspondentes ou bases complementares. | Requer bases complementares nas extremidades para formar pares de bases. |
| Eficiência | |
| É menos eficiente do que a ligadura de extremidade pegajosa | É mais eficiente do que a ligadura de extremidade romba. |
Resumo - Ligadura de ponta cega vs. pegajosa
As endonucleases de restrição são capazes de clivar o dsDNA e produzir fragmentos de DNA com extremidades diferentes. Eles reconhecem sequências específicas e restringem o DNA criando extremidades aderentes e cegas. As extremidades pegajosas têm bases desemparelhadas no final dos fragmentos. Extremidades cegas são criadas devido a uma clivagem reta e têm pares de bases nas extremidades. A ligação da extremidade pegajosa requer dois pedaços de DNA de fita simples complementares. A ligadura de extremidade cega ocorre entre quaisquer dois fragmentos de extremidade cega. Esta é a diferença entre ligadura romba e pegajosa.
