Diferença Entre Benzonase E DNase

2024 Autor: Mildred Bawerman | [email protected]. Última modificação: 2023-12-16 08:41

Diferença chave - benzonase vs DNase

A degradação dos ácidos nucléicos é importante para muitas técnicas de biologia molecular. É amplamente utilizado na tecnologia de DNA recombinante para se livrar de fragmentos indesejados de DNA e RNA. As enzimas que degradam o ácido nucleico são referidas como Nucleases e podem ser de diferentes tipos com base na função necessária. As nucleases que degradam o DNA são conhecidas como DNases, enquanto as que degradam o RNA são conhecidas como RNases. Essas enzimas são usadas principalmente em experimentos in vitro, onde testes moleculares in vitro são realizados para isolar DNA, RNA ou proteínas puros. As benzonases são um tipo de nucleases que degradam o DNA e o RNA, enquanto as DNases degradam apenas o DNA. Esta é a principal diferença entre Benzonase e DNase.

CONTEÚDO

1. Visão geral e diferença principal

2. O que é benzonase

3. O que é DNase

4. Semelhanças entre benzonase e DNase

5. Comparação lado a lado - Benzonase vs DNase em forma tabular

6. Resumo

O que é benzonase?

Benzonase é uma endonuclease geneticamente modificada de Serratia marcescens. Esta enzima é produzida em hospedeiros E. coli em escala industrial. A benzonase é capaz de clivar DNA de fita dupla, DNA linear, DNA circular e RNA de fita simples. Assim, a Benzonase é comercialmente importante. A enzima benzonase é um dímero de proteína que possui 245 aminoácidos idênticos, subunidades de ~ 30 kDa com duas ligações dissulfeto essenciais. A benzonase cliva os ácidos nucléicos em sua extremidade 5 'e resulta em fragmentos com as extremidades 5' livres. A benzonase pode clivar ácidos nucleicos em qualquer sequência, mas prefere regiões ricas em GC.

Benzonase é armazenado a -20 ⁰ C. O pH óptimo para a actividade da enzima é encontrado para ser 8,0-9,2. As aplicações da Benzonase incluem a preparação de amostras para eletroforese em gel de proteínas 2D, onde a Benzonase remove ácidos nucleicos ligados e remoção de contaminantes de ácido nucleico de preparações de proteínas recombinantes. Ele também é usado para reduzir a viscosidade de extratos de proteína e evitar o agrupamento de células em uma mistura de células.

O que é DNase?

A DNase é uma enzima hidrolítica nuclease que só é capaz de clivar o DNA de fita dupla. Existem dois tipos principais de DNases: DNase I e DNase II. A DNase I participa na clivagem de DNA de fita dupla para produzir polinucleotídeos com extremidades livres 5 '. A DNase II está envolvida na clivagem de DNA de fita dupla para produzir fitas polinucleotídicas com extremidades livres 3 'ou saliências.

DNase I

A DNase I funciona em um pH ótimo entre 7,0 - 8,0. A atividade da enzima depende de muitos cofatores iônicos que incluem Ca ²⁺, Mg ²⁺ ou Mn ²⁺. A atividade de Mg ²⁺ e Mn ²⁺ decide a função da DNase I. Na presença de Mg ²⁺, a DNase I cliva cada fita de dsDNA independentemente. Isso ocorre de maneira aleatória. Em contraste, na presença de Mn ^2+, a enzima cliva ambas as fitas de DNA aproximadamente no mesmo local. Essa clivagem resultará na produção de dois tipos de fragmentos de DNA; um tipo com extremidades cegas e outro tipo com uma ou duas saliências de nucleotídeos.

Figura 02: DNase

DNase II

A DNase II funciona a um pH ótimo de 4,5-5,0 e íons metálicos divalentes são necessários para sua atividade, semelhante à DNase I. O mecanismo da DNase II é conhecido por consistir em três etapas principais.

Múltiplas quebras de fita simples são induzidas dentro da estrutura do DNA.
São produzidos nucleotídeos e oligonucleotídeos solúveis em ácido.
O deslocamento hipercrômico não linear ocorre na última fase.

Os principais inibidores da enzima DNase incluem quelantes metálicos, metais de transição e produtos químicos como dodecil sulfato de sódio e β-mercaptoetanol.

As principais aplicações da DNase incluem a preparação de extratos de RNA livres de DNA e de proteínas, e a remoção de DNA molde durante experimentos de transcrição in vitro.

Quais são as semelhanças entre a benzonase e a DNase?

Ambos são enzimas hidrolíticas.
Ambos são nucleases.
Ambos participam clivando as ligações fosfodiéster dos ácidos nucléicos.
Ambos requerem um pH e temperaturas de armazenamento ideais para manter a atividade da enzima.
Os inibidores de enzimas incluem agentes quelantes, metais de transição e produtos químicos detergentes.
As aplicações estão focadas principalmente na obtenção de extratos de alta pureza de DNA, RNA e proteínas.
Ambas as enzimas podem ser produzidas por meio de engenharia genética.

Qual é a diferença entre benzonase e DNase?

Artigo Diff meio antes da tabela

Benzonase vs DNase
A benzonase é uma enzima capaz de clivar DNA de fita dupla, DNA linear, DNA circular e RNA.	A DNase é uma enzima capaz de clivar o DNA de fita dupla.
Substrato para a Enzima
Tanto o DNA quanto o RNA são substratos da benzonase.	O DNA é o substrato da DNase.
Estrutura
A faixa de pH ideal da benzonase é 7,0 -8,0	As faixas de pH ideais de DNase I são 7,0 - 8,0 e DNase II é 4,5 - 5,0.

Resumo - Benzonase vs DNase

As enzimas nuclease são amplamente utilizadas em diferentes procedimentos experimentais no que diz respeito à biologia molecular e engenharia genética. Benzonase e DNase são dois tipos de nucleases. A benzonase está envolvida na degradação do DNA e do RNA, enquanto a DNase está envolvida na clivagem do DNA de fita dupla. Esta é a diferença básica entre benzonase e DNase. No momento, esses dois tipos de nuclease são produzidos por meio de tecnologia de DNA recombinante, que produz enzimas de qualidade superior que são otimizadas para produção máxima.

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