A principal diferença entre HPLC de fase reversa e fase normal é que o HPLC de fase reversa usa uma fase estacionária não polar e uma fase móvel polar, enquanto o HPLC de fase normal usa uma fase estacionária polar e uma fase móvel menos polar.
A HPLC de fase normal é a técnica de HPLC mais antiga que Tswett usou em suas separações de extratos de plantas; ele usou giz em uma coluna de vidro. Esse foi o modo clássico de cromatografia que levou a nomeá-lo como a técnica “normal”. A HPLC de fase reversa, por outro lado, é o oposto da técnica normal, que os cientistas desenvolveram recentemente.